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안녕하세요 세포 만지는 연구원 맘쿵맘입니다 이번에는 hela cell 의 아류종인 RC32 cell 을 배양하고 유지하는 방법에 대해 알아보겠습니다
일단 현미경으로 세포가 얼마나 디쉬에 차있는지 확인을 하세요 70-80% 정도 일 때 계대를 하는 것이 좋습니다
1. 세포 배양액을 suction하여 제거합니다
2. DPBS (1x) 10ml 씩 넣고 워싱해줍니다 두번 해주세요
3. 워싱한 DPBS를 제거한 후 trypsin EDTA(0.25%) 을 1ml 분주하여 전반적으로 세포에 묻게해주세요
4. 37도 cell incubator에서 3분간 배양해주세요
5. DMEM complete media 5ml 씩 넣고 Pipet으로 세포를 잘 모아주세요
6. Conical tube 에 모은 세포를 1500rpm, 5분간 원심분리해주세요
7. 100mm dish 2개에 media를 10ml 씩 미리 분주해놓고 원심분리가 끝나면 상층액을 제거하세요
8. 2ml의 media 로 세포를 풀어줍니다
9. Cell counting 을 해서 100mm dish 에 6Ex5 cells 만큼 넣어줍니다
10. 잘 흔들어서 세포를 펴준다음 배양합니다
Complete Media는 DMEM high glucose media 에 10% FBS와 1% p/s를 넣어서 만드세요 저는 바이러스 titer 를 측정하기 위해 이 세포를 사용합니다
